採用EzMate自動移液系統,高效製備COVID-19檢測用的qPCR樣品

應用優勢

 

  • EzMate自動移液系統自動精準的自動化程序,節省新冠病毒qPCR核酸篩檢大量樣品製備時間並提高檢測效率
  • 與市面上多數耗材高度相容,檢測工作流程中無需更換實驗室用品

 

概述

 

新冠病毒的確診至今仍然以qPCR(即時定量聚合酶連鎖反應)核酸檢測為標準,然而機台的上機操作相當複雜,需要大量且專業的人力才有辦法因應暴增的檢測量。因此除了要有qPCR檢測機台之外,更需要自動化的機台來準備上機的樣本,才能有效大幅提升檢測量能;同時在檢測實驗室有一種新方法日益受到歡迎,這種方法是由以色列理工大學的研究人員以qPCR和檢體群檢測(pooling test)為基礎開發,一次可以同時檢測一批檢體群,非常適合大量篩檢使用。不過,這些方法需精熟的操作技巧且步驟繁瑣,對實驗室人員來說亦是項極為重大的挑戰。

 

EzMate自動移液系統旨在簡化移液程序,並消除因手動操作所導致的錯誤。EzMate用於傳統qPCR實務操作中的樣品製備使用時,與市面上實驗室用的多數耗材均相容,它可以無縫接軌到製程之中,自動從核酸萃取系統接收樣品,接著實施PCR前處理,再上樣到qPCR設備的樣品盤上。在此程序中不需更換耗材,藉此減少交叉污染的可能性,並加速樣品製備。

 

此外,EzMate也可以用於qPCR實施檢體群組化法時的樣品製備上,以自動移液來取代傳統的手動操作,藉此簡化樣品製備的工作流程、避免錯誤並提高檢測量。

 

在以下範例中,我們將展示EzMate在採用/非採用檢體群樣品的qPCR檢測操作上,如何應用於COVID-19病毒篩檢中,了解EzMate自動移液系統如何助益提高實驗室處理量。

 

工作流程

 

整體工作流程如圖1所示,若需檢體群組化時則將分成兩個程序。相容耗材如圖2所示。

Figure 1. Workflow of qPCR detection by using EzMate automated pipetting system. 1. 採用EzMate自動移液系統實施的qPCR檢測工作流程。

 

EzMate自動移液系統可以在取樣後進行檢體群組化、核酸萃取和qPCR樣品製備等程序,以便後續的qPCR檢測。它節省人力、時間同時避免人為錯誤,藉此提高準確性和精確度。

 

Figure 2. Compatible with a variety of consumables.

2. 相容於各種耗材。

 

EzMate自動移液系統相容於各種耗材,方便使用者選擇。

 

A.從核酸萃取系統接收之樣品盤/試管中製備樣品(34)

 

[樣品盤版準備流程] 

 

  1. 採樣
  2. 萃取核酸
  3. 製備qPCR樣品
  1. 轉移標準混合物(mastermix)
  2. 轉移樣品和對照樣品
  1. qPCR檢測

(A) 製備標準混合物並將其分到4個試管(以藍色大圓點示之)內,然後再將其轉移到96孔的PCR樣品盤(以紅色圓點示之)中。在深孔樣品盤(以藍色小圓點標示內萃取樣品的核酸,然後再將其轉移到96孔的PCR樣品盤(以紅色圓點標示)中。製備完成後,即已備妥樣品盤以供qPCR檢測使用。

 

綠色圓點代表樣品製備時使用的廢棄移液吸管。N和P則分別代表陰性和陽性的對照樣品。其中只有標準混合物的製備和分離為手動操作。其他均為自動化操作。

 

(B) 需為樣品盤中製備時的轉接頭和移液模組進行包裝。

 

(A)Figure 3. Direct sample preparation in plate for qPCR detection from nucleic acid extraction system

(B)

Figure 3.package3. 從核酸萃取系統接收、要進行qPCR檢測之樣品盤中直接製備樣品。

 

[試管版準備流程] 

 

(A) 製備標準混合物並將其分到4個試管(以左邊面板上的藍色圓點示之)內,然後再將其轉移到96孔的PCR樣品盤(以紅色圓點標示)中。在樣品試管(以中間面板上的藍色圓點標示)內萃取樣品的核酸,然後再將其轉移到96孔的PCR樣品盤(以紅色圓點標示)中。製備完成後,即已備妥樣品盤以供qPCR檢測使用。

 

綠色圓點代表樣品製備時使用的廢棄移液吸管。N和P則分別代表陰性和陽性的對照樣品(以紫色圓點標示)。其中只有標準混合物的製備和分離為手動操作。其他均為自動化操作。

 

(B) 需為試管中製備時的轉接頭和移液模組進行包裝。

 

(A)Figure 4. Direct sample preparation in tube from nucleic acid extraction system.

(B)

4. 從核酸萃取系統接收之試管中直接製備樣品。

 

B.qPCR檢測前的樣品檢體群組化(56)

 

  1. 採樣
  2. 轉移樣品
  3. 檢體群組化(P-BEST檢體群組化法詳如2020年Hertz等人所述*)
  4. 萃取核酸
  5. 製備qPCR樣品
  1. 轉移標準混合物(mastermix)
  2. 轉移樣品和對照樣品
  1. qPCR檢測

 

 (A)

Figure 5. Sample transferring(B)

Figure 5 package5.樣品轉移

 

(A)首先將樣品放入試管中(以藍色圓點標示),然後再將其自動轉移到96孔的PCR樣品盤(以紅色圓點標示)中。綠色圓點代表樣品製備時使用的廢棄移液吸管。

 

(B)需為樣品轉移時的轉接頭和移液模組進行包裝

 

(A)

Figure 6. P-BEST Pooling.(B)

Figure 6. package

6.P-BEST檢體群組化。

 

(A)因應P-BSET檢體群組化法所需,共計準備384個樣品(以藍色圓點標示之)。以Python編寫程式碼將384個樣品自動從96孔的PCR樣品盤轉移到48個試管中,完成檢體群組化操作(2020年Hertz等人*)。檢體群組化完成後,製備核酸萃取所需的48個試管,如圖4所示。

 

(B)需為P-BEST檢體群組化時的轉接頭和移液模組進行包裝。

 

備註:*

Shental, N., Levy, S., Wuvshet, V., Skorniakov, S., Shalem, B., Ottolenghi, A., Greenshpan, Y., Steinberg, R., Edri, A., Gillis, R., Goldhirsh, M., Moscovici, K., Sachren, S., Friedman, L.M., Nesher, L., Shemer-Avni, Y., Porgador, A., and Hertz, T. (2020). Efficient high-throughput SARS-CoV-2 testing to detect asymptomatic carriers. Sci. Adv. 6: eabc5961.

 

下載應用案例

 

PCR/qPCR準備相關應用案例

 


 

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